Coloranții fluorescenți se referă la substanțe care emit o undă luminoasă cu o anumită lungime de undă care este mai mare decât unda luminoasă care absoarbe lumina și sunt în majoritate compuși care conțin inele benzenice sau heterocicluri și au legături duble conjugate.
Coloranții fluorescenți utilizați în mod obișnuit sunt descriși după cum urmează:
(1) Coloranți fluorescenți utilizați în mod obișnuit pentru etichetarea imunofluorescenței
FITC (izotiocianat de fluoresceină): verde 530nm
PE (ficoeritrina): galben portocaliu 575nm
488nm lungime de undă excitație cu laser argon ion
APC (aloficocianină): roșu 660nm
Laser He-Ne cu lungime de undă de 630 nm sau excitație laser cu diodă roșie
PerCP (proteină clorofilă polificoxantină): roșu închis 675nm
PI (iodură de propidiu): roșu portocaliu 620nm
(2) Autofluorescența celulară
Semnalul de autofluorescență este un semnal de zgomot, care în cele mai multe cazuri va interfera cu rezoluția și măsurarea semnalelor de fluorescență specifice. În măsurarea imunocitochimiei etc., pentru anticorpii fluorescenți cu niveluri de legare scăzute, cum se îmbunătățește raportul semnal-zgomot este cheia.
(3) Etichetarea imunofluorescentă
Colorarea markerului utilizată în mod obișnuit este colorarea directă prin imunofluorescență și colorarea indirectă prin imunofluorescență. Atunci când se efectuează analize cu doi parametri sau multi-parametri, este adesea necesară efectuarea unei etichetări combinate a anticorpilor fluorescenți. În prezent, există etichete în două culori, trei culori și patru culori.